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关于肾结核硕士毕业论文范文,与PCR检测尿中结核分枝杆菌相关论文范本

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中图分类号 R450 文献标识码 A 文章编号 1005-2720(2009)36-1913-01

在泌尿系结核中肾结核最为常见、最先发生,以后由肾脏蔓延至整个泌尿系统.因此,肾结核实际上具有代表着泌尿系结核的意义.肾结核的病变过程非常缓慢,在临床表现是膀胱刺激症状为主.因此对肾结核的诊断,是以膀胱炎的症状(尿频、尿急、尿痛)为线索.除有引起膀胱炎的明显原因外,都应考虑肾结核的可能,必需作进一步的系统性检查.尿液常规检查、尿普通细菌培养、尿液结核杆菌检查等.但由于结核菌的遗传特性决定的生长周期长,致使常规检查细菌学检查方法存在着灵敏度低、操作复杂、需时间较长和影响因素较多、不易标准化等特点,PCR是聚合酶链式反应的简称,是一种酶促化学反应,可以在试管里将待测的目的基因在很短的时间内扩增几十万倍乃至上百万倍,大大提高了基因诊断的灵敏度,降低了分析的难度.我们采用荧光PCR技术检测患者尿中结核杆菌来辅助诊断肾结核,以期取得更重要的临床诊断价值,现将结果报告如下.

1 资料与方法

1.1 一般资料 我院2005~2006年收治的疑似肾结核患者78例.

1.2 方法 留晨尿的中段尿于无菌试管中.收到标本后,取晨尿10ml,混匀,取1ml 14000r/min离心10min待检.标本若为血性标本先用等量红细胞裂解液处理,14000r/min离心10min,去上清留沉淀.标本均各留取2份,一份备用,一份检测.荧光定量PCR标准品与标本各2L加入PCR反应混合液中,离心30s后置于PCR仪上,行PCR扩增反应.采用PCR核酸扩增方法结合荧光探针检测技术,通过荧光自动PCR仪实现在全封闭反应体系中进行核酸扩增和检测.

2 结果

78例肾结核疑似患者最后确诊为肾结核54例,其中38例尿中TB-PCR检出阳性,而非结核患者无1例检出尿TB-PCR阳性.

3 讨论

尿液结核杆菌检查一般采用24小时尿液抗酸杆菌检查;结核杆菌是抗酸杆菌中的一种.24小时尿液浓缩作直接涂片抗酸染色后作抗酸杆菌检查,方法简单,结果迅速,阳性率可达50~70%,但包皮垢杆菌、草分支杆菌也是经常在尿液中存在的抗酸杆菌,因此尿液中的抗酸杆菌并不等于结核杆菌.但是反复多次的这种检查,均能找到同样的抗酸杆菌,并且结合临床的病史与特征的参考,对肾结核的诊断还是有一定的参考意义.尿结核菌培养:尿结核菌培养对肾结核的诊断有决定作用.尿液培养结核菌阳性,即可肯定为肾结核的诊断.但培养时间较长,需1~2个月才能得到结果,其阳性率可高达90%.尿结核菌动物接种:尿结核菌动物接种的结果诊断肾结核的价值极高,可作为肾结核诊断的依据,其阳性率高达90%以上.但费时较长,亦长需2个月才能得结果.


如何写肾结核硕士小论文
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PCR反应的特异性决定因素为:(1)引物与模板DNA特异正确的结合;(2)碱基配对原则;(3)Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;(4)靶基因的特异性与保守性.其中引物与模板的正确结合是关键.引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的.聚合酶合成反应的忠实性及TaqDNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度.再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高.


该文出处:http://www.svfree.net/moban/436060.html

PER产物的生成量是以指数方式增加的,能将皮克(pg等于10-12)量级的起始待测模板扩增到微克(μg等于-6)水平.能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在细菌学中最小检出率为3个细菌.PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性一退火一延伸反应,一般在2~4小时完成扩增反应.扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广.对标本的纯度要求低,不需要分离病毒或细菌及培养细胞,DNA粗制品及RNA均可作为扩增模板.可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活组织等DNA扩增检测.

本组78例肾结核疑似患者最后确诊为肾结核54例,其中38例尿中TB-PCR检出阳性,而非结核患者无1例检出尿TB-PCR阳性.这说明,TB-PCR的检出阳性率约70.37%,特异性100%,且其中有8例患者,尿中TB-PCR检出阳性,而其他检查均为阴性,抗结核治疗3个月后明显有效,这说明在早期诊断上本法优于

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其他检查.不难看出荧光PCR技术检测尿中结核杆菌对临床肾结核及泌尿系结核的诊断且有无可代替的重要作用.

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