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摘 要 :目的:探讨皮鳞癌一号方对皮鳞癌A431细胞增殖抑制作用.

方法:不同浓度的皮鳞癌一号方作用于A431细胞24h、48h、72h后,采用四甲基偶氮唑蓝(M1Tr)显色法检测细胞增殖抑制率.

结果:MTT法显示,随着皮鳞癌一号方作用的时间延长及剂量增加对A431细胞增殖的抑制作用增强,有明显的时间和剂量依赖性,与对照组比较差异有显著性(P<0.01).

结论:皮鳞癌一号方具有抑制人皮鳞癌A431细胞的增殖及诱导细胞凋亡作用.

关 键 词 :皮鳞癌一号方 A431细胞 细胞周期

【中图分类号】R4 【文献标识码】A 【文章编号】1671-8801(2013)10-0002-01

本实验选取的皮鳞癌一号方由遵义医药高等专科学校提供,每ml试液相当于生药2g,以其中所含白头翁中的三萜类皂苷含量作为质量评价标准.本研究通过体外实验,从皮鳞癌A431细胞周期探讨皮鳞癌一号方对SCC的影响.

1.材料

1.1 药物.皮鳞一号方由白头翁、莪术等中药组成,试验品由遵义医药高等专科学校提供,每ml相当于生药2g,以白头翁皂苷B4含量及浸膏收率作为质量控制标准,低温保存备用.

1.2 试剂.高糖的DMEM、胎牛血清购自Hyclone公司,MTT购自Amresco公司(201105).

1.3 细胞系.A431细胞购自武汉大学中国典型培养物保藏中心.

2.方法

2.1 细胞培养.A431细胞培养于含10%胎牛血清、青霉素(100U/L)和链霉素(100U/L)的高糖DMEM培养基中,置于5%CO2、37℃和饱和湿度的培养箱中.

2.2 MTT法测定皮鳞癌一号方对A431细胞的增殖抑制作用.取对数生长期的细胞,调整细胞密度为1.25×105/ml,160μl/孔接种于96孔板.培养24h后,每孔加40μl不同浓度的药物,药物浓度设5个梯度,分别为原药的1/400、1/200、1/100、1/50、1/25.同时设空白调零组(加200μl无血清培养基)、阴性对照组(不加药物)、阳性对照组(5-Fu10μg/ml).因皮鳞癌一号方有颜色,加设不同浓度颜色对照组.分别培养24h、48h、72h后,弃去上清,加200μl无血清培养基及20μlMTT(5mg/ml),置于二氧化碳培养箱培养4h后,弃上清,加150μlDMSO,振荡10min后,于酶联免疫检测仪490nm处测定吸光度值(OD值).实验重复三次.


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细胞生长抑制率(%)等于1-(实验组OD-颜色对照组OD/阴性对照组OD-空白调零组OD)×100%.


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2.3 统计学方法.采用SPSS13.0软件进行统计分析,所有计量资料用X±S表示,多组间比较采用单因素方差分析,所有检验均为双侧检验,并以α等于0.05作为检验水准.P<0.05时认为有统计学意义.

3.结果

MTT法测定皮鳞癌一号方对A431细胞的增殖抑制作用.在浓度为1/400,1/200,1/100,1/50,1/25作用于A431细胞24h、48h、72h后,与阴性对照组比较,各浓度组对A431细胞均有增殖抑制作用,且随着药物浓度的增高和作用时间的延长,其对A431细胞的增殖抑制作用愈明显.见表1.

4.讨论

细胞周期是由DNA合成前期(G1期)、DNA合成期(s期)、DNA合成后期(G2期)、有丝分裂期(M期)组成.在细胞增殖周期中,G1期、s期、G2期、M期各自起到非常重要的作用.此外,细胞还可以从G1期暂时离开细胞周期,停止有丝分裂,进入G0期(静止期).在G0期细胞接受外部信号刺激,决定细胞是进入S期进行DNA复制并完成分裂发生恶性增殖还是进入相对静止期G0期.如果阻止细胞由G0期进入S期,则肿瘤细胞的无限增殖可以得到控制[2].

本实验显示:在浓度为1/400,1/200,1/100,1/50,1/25作用于A431细胞24h、48h、72h后,各浓度组对A431细胞均有增殖抑制作用.表明皮鳞癌一号方可以抑制皮鳞癌A431细胞增殖.

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参考文献

[1] Sitko JC,Yeh B,Kim M,et a1.SOCS3 regulates p21 expression and cell cycle arrest in response

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